Artigo: Otimização da metodologia de extração de DNA de nematóides entomopatogênicos na Embrapa Trigo

O uso do sistema de plantio direto, apesar dos benefícios que traz à agricultura, tem como uma de suas consequências o aumento do número de pragas de solo. Um dos métodos de controle é o químico. Entretanto, o uso dos pesticidas trazem diversas problemas ao ambiente e à saúde humana, não sendo ainda satisfatório no controle de pragas de solo. Outras alternativas são o controle genético e o controle biológico.

 

Diversas pesquisas têm sido feitas para o controle biológico de insetos, usando fungos, bactérias e nematóides entomopatogênicos. Os nematóides são organismos microscópicos, medindo cerca de 1 mm, de corpo cilíndrico, basicamente aquáticos, embora possam ser encontrados em quase todos os tipos de habitats. Os nematóides entomopatogênicos são assim chamados porque causam a morte dos insetos através da introdução de uma bactéria que provoca, de forma rápida, infecção geral no organismo. Eles têm quatro fases larvais e uma adulta. A única forma de vida livre desses nematóides é a juvenil infectiva, que corresponde a terceira fase larval. Nessa forma, eles se deslocam no solo em busca do inseto alvo, tornando-os assim mais eficientes do que os fungos e bactérias no solo no controle de insetos.

 

Com a limitada caracterização morfológica na identificação de grupos de nematóides, têm-se utilizado ferramentas alternativas, como os métodos moleculares para o estudo da variabilidade genética e acesso da relação filogenética entre espécies. O passo inicial para essas determinações é a obtenção do DNA das espécies de nematóides entomopatogênicos. No Laboratório de Biotecnologia da Embrapa Trigo, utilizou-se o protocolo para a extração de DNA, através de um kit adquirido comercialmente “NucleoSpin Tissue” (Macherey-Nagel). Entretanto, como este kit não era específico para nematóides, não foi possível extrair DNA em quantidade adequada para as análises moleculares posteriores. Desta forma, foi necessário realizar diversos ajustes na metodologia até se obter o DNA na forma satisfatória.

 

No Comunicado Técnico Online, 257 “Extração de DNA genômico de nematóides entomopatogênicos na Embrapa Trigo” Disponível: http://www.cnpt.embrapa.br/biblio/co/p_co257.htm são descritos os ajustes metodológicos de extração de DNA genômico, realizados no laboratório de Biotecnologia da Embrapa Trigo para melhor adequa-lo para os nematóides entomopatogênicos, a partir do protocolo proveniente do Kit NucleoSpin Tissue, protocolo 5.1, do manual baseado para utilização de tecido humano ou animal e cultura de células.

 

Observou-se que os ajustes realizados no protocolo aumentaram o rendimento de DNA obtido, tornando-se mais adequado para amostras de nematóides entomopatogênicos que permitirão maior eficiência da utilização das técnicas moleculares quando aplicadas, posteriormente, para identificação genética.

 

Ana Lídia Variani Bonato

Pesquisador Embrapa Trigo

Amanda Nery da Silva

Graduada em Biomedicina- ULBRA-Carazinho-RS

Leonel Thomas Bosa

Estudante de Biomedicina- ULBRA-Carazinho-RS

Marcio Voss

Pesquisador Aposentado Embrapa Trigo

joseani@cnpt.embrapa.br